E. D. Mytsa, L.Yu. Kokaeva, S.N. Elanski
Oomicete Fitoftora infestans (Mont) de Bary uzrokuje kasnu bolest, opasnu bolest krumpira i rajčice. Jedan od glavnih izvora primarnog inokuluma P. infestans su reproduktivne strukture debelih zidova - oospore.
Hibridne oospore nastale kao rezultat križanja genetski različitih roditeljskih sojeva doprinose povećanju genotipske raznolikosti u populaciji, uslijed čega se ubrzava proces prilagodbe sojeva novim sortama i primijenjenim fungicidima.
Formiranje oospora P. infestans na terenu zabilježen je u mnogim zemljama svijeta: Rusija (Smirnov i sur., 1999.), Norveška (Hermansen i sur., 2002.), Švedska (Strömberg i sur., 2001.), Nizozemska (Kessel i sur., 2002.) i druge regijama. Oospore su u stanju preživjeti više od 2 godine u tlu u održivom stanju (Bødker i sur., 2006.) i uzrokuju zarazu biljaka nakon prezimljavanja (Ulanova i sur., 2010.; Lehtinen i sur., 2002.).
Ranije se pokazalo da lišće biljaka različitih slojeva grma krumpira ima razlike u otpornosti na kasnu plamenjaču; povećava se od donjih listova do gornjih. Ta tendencija ne ovisi o starosti lišća, biljnoj dobi ili sorti krumpira (Vesper i sur., 2003). Istodobno, u literaturi nismo uspjeli pronaći podatke o razlikama u intenzitetu stvaranja oospore u lišću različitih slojeva grma krumpira. Međutim, ako takve razlike postoje, tada ih treba uzeti u obzir prilikom uzimanja uzoraka lišća za analizu nastanka oospora i prilikom interpretacije rezultata dobivenih od drugih autora. Cilj ovog rada bio je proučiti nastajanje oospora u odvojenim listovima različitih slojeva biljke krumpira smještenih u istim uvjetima u vlažnim komorama.
Materijali i metode
Koristili smo 5 izolata P. infestans različite vrste parenja izolirane iz zahvaćenih uzoraka donesenih iz područja Moskve, Rjazana i Lenjingrada. Od njih su odabrana 3 para sojeva različitih vrsta parenja, dajući obilne oospore pri ispitivanju u agar zobi.
Za testiranje smo koristili biljke krumpira bez virusa sljedećih sorti uzgajanih u stakleniku (u tresetnom supstratu): rani Sandrin, Zorachka, Uladar, Osiris, srednji rani Ilyinsky, srednja sezona Yanka.
Za analizu su odabrani jednostavni listovi s različitih nivoa biljke krumpira. Tri su lista odabrana s donje razine (4 donja složena lišća), tri s vrha (3-4 složena lišća na vrhu) i tri lista iz središta grma. Jednostavni listovi vagali su se, fotografirali na koordinatnom papiru (da bi se izračunao volumen i površina), a zatim stavili naopako na površinu sterilne vode, ulivene 25 ml u Petrijeve posude. Tada je svaki list zaražen jednom kapi miješane suspenzije izolata zoosporangije A1 i A2 tipa parenja. Za tri lista prikupljena sa svake razine korišten je inokulum od tri različita para izolata. Jedan je list zaražen mješavinom inokuluma jednog para izolata.
Da bi se pripremila suspenzija zoosporangije, izolati različitih vrsta parenja uzgajali su se na agar zobi tijekom 7 dana, nakon čega su zoosporangije isprane sterilnom destiliranom vodom. Koncentracija inokuluma bila je 5-7 zoospora u vidnom polju mikroskopa pri uvećanju od 80x. Svaki je list kontaminiran jednom kapi miješane suspenzije zoosporangia izolata A1 i A2 tipa parenja.
U svim pokusima korištena su 3 lista krumpira po varijanti. Nakon 20 dana inkubacije na 18 ° C, svaki je list homogeniziran u mužaru s 2 ml destilirane vode. Iz nastale suspenzije uzeta su 3 uzorka iz kojih su pripremljeni pripravci za mikroskopiranje.
U svakoj je varijanti pregledano 180 vidnih polja, nakon čega je preračunat broj oospora po 1 mm2 površina lima. Rezultati brojanja za svaku varijantu su prosječeni.
Za izračunavanje intervala pouzdanosti (μ) za razinu značajnosti od 0,05 korištena je sljedeća formula
gdje je s standardno odstupanje, n broj mjerenja, t konstanta t-testa za razinu značajnosti od 0,05. Svi izračuni izvedeni su u programu Excel (paket Microsoft Office).
Rezultati i rasprava
Inokulacija lišća prikupljenog iz različitih slojeva grma krumpira i smještenog u istim uvjetima u vlažnim komorama otkrila je razlike u intenzitetu stvaranja oospora. U svim ispitivanim sortama maksimalan broj oospora nastao je cijepljenjem lišća sakupljenog s donjeg i srednjeg sloja grma. Nisu utvrđene značajne razlike u stvaranju oospora u donjem i srednjem lišću.
Minimalan broj oospora nastao je u lišću gornjeg sloja (slika 1).
U lišću donjeg i srednjeg sloja nastao je maksimalan broj oospora u sorti Sandrin, Ilyinsky, Zorachka, Uladar i Osiris. Nešto su manje intenzivno nastali u lišću sorte Yanka. Maksimalan broj oospora u lišću gornjeg sloja uočen je u lišću sorte Uladar, zatim su Zorachka, Osiris, Yanka, Ilyinsky, Sandrin išli u opadajućem redoslijedu, ali nisu sve razlike bile statistički značajne.
Lik: 1. Stvaranje oospora u lišću različitih slojeva grma krumpira. Donji su listovi triju donjih razina grma, gornji su 3-4 složena lišća s vrha biljke, srednji su sa sredine grma.
Trake pogrešaka prikazuju interval pouzdanosti za razinu značajnosti od 0,05.
Na terenu mikroklimatski uvjeti također doprinose stvaranju oospora u donjim i srednjim listovima grma: veća vlažnost, smanjena sunčeva insolacija i dnevna kolebanja temperature (Harrison, 1992.). Vrhunsko prskanje rezultira s manje pesticida na dnu i sredini grma. Da bi se smanjilo stvaranje oospora, treba koristiti tehnologije koje omogućuju uspješno donošenje fungicida u donji i srednji dio grma. Dobri rezultati mogu se dobiti korištenjem turbulentnih raspršivača zraka i sistemskih fungicida koji se mogu proširiti na neobrađene dijelove grma.
Ovaj je rad podržala Ruska zaklada za znanost (projekt br. 14-50-00029).
Članak je objavljen u časopisu "Zaštita krumpira" (br. 2, 2015)